ППД-туберкулін для ссавців очищений для алергічної діагностики туберкульозу тварин

Abstract

В роботі викладено теоретичне та експериментальне обґрунтування, узагальнені результати дослідження щодо розробки, та впровадження препарату «ППД-туберкулін для ссавців очищений». Відібрані шляхом селекції та задепоновані в депозитарії ДНКІБШМ виробничі штами M. bovis Valleе КМІЕВ-9 та M. bovis Valleе КМІЕВ-9КМ виявились високопротеїногенними, відповідають вимогам Директиви Ради ЄС 97/12 (від 17 березня 1997 р.) і використані під час виготовлення дослідно-виробничих серій ППД-туберкуліну для ссавців очищеного. Для адаптації, селекції та накопичення бактерійної маси виробничих штамів розроблені поживні середовища Сотона КФ та Сотона ХБ, на яких культура M. bovis починає рости раніше на (4,2±1,1) діб і дає більше накопичення бактерійної маси (мікробна плівка формується на (4,1±0,9) діб раніше, в порівнянні з вихідним штамом). Розроблено нові технологічні прийоми виготовлення ППД-туберкуліну з використанням методів мембранної мікрофільтрації та ультрацентрифугування при 14 тис. об./хв., що дозволило отримати високоактивний та специфічний діагностичний алерген. Під час виготовлення туберкуліну з використанням розробленої технології в препараті достовірно збільшуються (p<0,05) вихід протеїну після осадження ТХО на (8,6±0,5) г, вихід туберкуліну з 1 л середовища на (0,7±0,1) г та масова частка білку на (0,6±0,1) мг/см3. Препарат виходить гарантовано стерильним та високо очищеним.

The thesis is devoted to identify theoretical and practical justification, summarized research results of development, implementation and harmonization with the EU requirements «PPD Tuberculin Mammalian purified» drug for the allergic reactions of the macroorganism. Selected by breeding, the sealed production strains M. bovis Valle KMIEV-9 and M. bovis Valleе KMIEV-9KM appeared to be highly proteinogenic, they comply with the requirements of Council Directive 97/12 (dated March 17, 1997) and used during the production of experimental production series PPD-tuberculin for purified mammalian. The mass fraction of protein in a sample of tuberculin made from the strain M. bovis Valle KMIEV-9 is (0,89 ± 0,1) mg / cm3, while in the sample of tuberculin of the strain M. bovis Vallеe, KMIEV-9KM it is significantly higher (p <0 , 05) and it comes up to (1.20 ± 0.2) mg / cm3. The production strain of mycobacterium M. bovis Valleе KMIEV-9KM during cultivation on a synthetic nutrient medium of Soton HB or KF allows to accelerate the growth and increase the accumulation of bacterial mass of mycobacteria from one vial to (16,1 ± 0,2) mg and allows to increase the output of tuberculin accordingly to (1.20 ± 0.1) mg / cm3. For the adaptation, selection and accumulation of production strains bacterial mass, Soton KF and Soton-KhB nutrient media were developed, on which the M. bovis culture begins to grow (4.2 ± 1.1) days earlier and gives more accumulation of bacterial mass (microbial film is formed (4,1 ± 0,9) days earlier, in comparison with an initial strain). New technological methods of PPD-tuberculin manufacturing have been developed: the method of obtaining tuberculin from culture fluid and bacterial mass of mycobacteria, and the method of manufacturing PPD-tuberculin using membrane microfiltration and ultracentrifugation methods, which allowed to obtain highly active and specific diagnostic allergen.