Синтез оксида азота (Nо) в корнях этиолированных проростков гороха

Abstract

Изучали уровень оксида азота (NO) в корнях двухсуточных этиолированных проростков гороха посевного (Pisum sativum L.) с использованием флуоресцентного зонда DAF-2DA (4,5-диаминофлуоресцеин диацетат) и флуоресцентной микроскопии. Анализировали поперечные срезы корня толщиной 100-150 мкм (участок корня 10-15 мм от апекса). Значительный уровень NO в корнях обнаружен при выращивании проростков на воде (контроль). Добавление в среду выращивания растений итропруссида натрия (НПН) (4 мМ), KNO3 (20 мМ), NaNO2 (2 мМ), L-аргинина (2 мМ) способствовало увеличению уровня NO по сравнению с контролем в 1,7 – 2,3 раза. Ингибиторы животной NO-синтазы – L-NAME (Nω-nitro-L-arginine methyl ester hydrochloride) (1 мМ), аминогуанидин (aminoguanidine hydrochloride) (1 мМ), снижали интенсивность флуоресценции в срезах корней на фоне всех изучаемых соединений. Ингибитор нитратредуктазы – вольфрамат натрия (150 мкМ), уменьшал на 60 % интенсивность флуоресценции в корнях в варианте с KNO3. Поглотители оксида азота – PTIO (2-phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide) (100 мкМ) и гемоглобин (4 мкМ), снижали уровень NO во всех вариантах. Неактивный аналог НПН – ферроцианид калия (4 мМ) – ингибировал генерацию NO. Результаты обсуждаются в связи с путями синтеза NO в растениях.

The level nitric oxide (NO) in roots etiolated seedlings pea sowing (Pisum sativum L.) with the help of a fluorescent probe DAF-2DA ((4,5-diaminofluorescein diacetate) and fluorescent microscopy was studied. The cross cuts of a root thickness 100-150 µm (a site of a root of 10-15 mm from apex) was analyzed. Considerable level NO in roots is found out at cultivation of seedlings on water (con trol). Addition on environment of cultivation plants the sodium nitroprusside (SNP) (4 mM), KNO3 (20 mM), NaNO2 (2 mM), L-arginine (2 mM) promoted increase of level NO in comparison with the control in 1,7 – 2,3 time. The inhibitors animal NO-synthase – L-NAME (Nw-nitro-L-arginine methyl ester hydrochloride (1 mM) and aminoguanidine (1 mM) reduced intensity of fluorescence of cuts roots on a background of all investigated compounds. The inhibitor of nitrate reductase – so dium tungstate (150 µM), reduced by 60% intensity of fluorescence in roots in variant with KNO3. The NO scavengers – PTIO (2-phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide) (100 µM) and hemoglobin (4 µM), reduced level NO in all variants. Inactive analogue of SNP – potassium fer rocyanide (4mM), has inhibit the generate nitric oxide. Results are discussed in connection with ways of synthesis NO in plants.

Вивчали рівень оксиду азоту (NO) в коренях дводобових етіольованих проростків гороху по сівного (Pisum sativum L.) з використанням флуоресцентного зонда DAF-2DA (4,5-діамінофлуоресцєїн діацетат) і флуоресцентної мікроскопії. Аналізували поперечні зрізи ко реня завтовшки 100-150 мкм (ділянка кореня 10-15 мм від апексу). Значний рівень NO в ко ренях знайдений при вирощуванні проростків на воді (контроль). Додавання в середовище вирощування рослин нітропрусиду натрію (НПН) (4 мМ), KNO3 (20 мМ), NaNO2 (2 мМ), L аргініну (2 мМ) сприяло збільшенню вмісту NO порівняно з контролем в 1,7 – 2,3 раза. Інгібі тори тваринної NO-синтази – L-NAME (Nω-nitro-L-arginine methyl ester hydrochloride) (1 мМ), аміногуанідин (aminoguanidine hydrochloride) (1 мМ), знижували інтенсивність флуоресценції в зрізах коренів на фоні всіх сполук, що вивчалися. Інгібітор нітратредуктази – вольфрамат натрію (150 мкМ), зменшував на 60 % інтенсивність флуоресценції в коренях у варіанті з KNO3. Поглиначі оксиду азоту – PTIO (2-phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide) (100 мкМ) і гемоглобін (4 мкМ), знижували рівень NO в усіх варіантах. Неактивний аналог НПН – фероціанід калію (4 мМ) – інгібував генерацію NO. Результати обговорюються у зв'я зку з можливими шляхами синтезу NO в рослинах.